Últimamente se está poniendo de moda el término PCR en relación a los famosos test para detectar positivos en coronavirus, ¿Pero sabemos realmente como se detecta el coronavirus? Te lo explicamos como se realizan los test de coronavirus.
El nombre real del ensayo que se realiza es RT-qPCR ya que consta de una retrotranscripción (para pasar el genoma del virus a ADN ya que inicialmente es ARN) y una PCR en tiempo real que mediante unos cebadores específicos y conociendo el genoma del virus permiten “amplificar” las regiones de ADN que queremos (en este caso secuencias del virus).
El primer paso consiste en obtener una muestra del paciente que pensamos puede estar contagiado. Las muestras se extraen del tejido epitelial respiratorio con un hisopo introducido a través de la nariz.
Una vez se obtienen las muestras el primer paso es obtener todo el transcriptoma (ARN que se encuentran dentro de las células); para ello el mecanismo que se utiliza es lisar las células, es decir romperlas y tratar el resultante con una DNasa, que destruirá todo el ADN y nos quedaremos con el ARN purificado.
El siguiente paso consiste en la retrotranscripción, es decir, convertir en ADN todo el ARN encontrado y para ello se utiliza la retrotranscriptasa (enzima que utilizan todos los retrovirus para convertir su ARN en ADN). Este paso es necesario porque la enzima que se utiliza en la PCR es la Taq polimerasa la cual utiliza como sustrato ADN.
Por último, se realiza una qPCR; que consiste en una PCR en tiempo real utilizando dNTPs (nucleótidos) marcados y cebadores específicos de los genes del virus (E, N y RdRp); que es capaz de medir tras cada ciclo la concentración de ADN presente en el tubo mediante fluorescencia. Si se produce un aumento de fluorescencia quiere decir que se están amplificando los genes del virus y por ende nos encontramos ante un positivo; si no se produce fluorescencia quiere decir que no se está amplificando y por consecuencia es negativo.
Descubre además cómo se se realizan los test de anticuerpos aquí.
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